ten główna różnica między hybrydyzacją kolonii a łysinkami jest to, że Hybrydyzacja kolonii jest metodą stosowaną do selekcji kolonii bakteryjnych z pożądanymi genami, podczas gdy hybrydyzacja łysinkowa jest metodą selekcji fagów z pożądanymi genami. Ponadto hybrydyzację kolonii można zastosować w przeszukiwaniu bibliotek opartych na plazmidach lub kosmidach, podczas gdy hybrydyzację łysinek można zastosować w przeszukiwaniu bibliotek fagowych.

Hybrydyzacja kolonii i łysinek to dwie techniki stosowane w przeszukiwaniu bibliotek genomowych lub cDNA. Są również nazywane winda kolonii oraz winda nazębna odpowiednio.

Kolonia, hybrydyzacja kolonii, przesiewanie biblioteki, płytka nazębna, hybrydyzacja płytek

Co to jest hybrydyzacja kolonii

Hybrydyzacja kolonii to metoda przesiewowa stosowana w selekcji kolonii bakteryjnych o pożądanej sekwencji DNA. Jest również nazywany hybrydyzacja kolonii, podnoszenie kolonii lub replika poszycia. Umożliwia przesiewanie kolonii wysianych z dużą gęstością. Oryginalna procedura hybrydyzacji kolonii została opracowana przez Grunsteina i Hognessa. Najpierw kolonie bakteryjne można przekształcić na błonę i kolonie bakteryjne poddać lizie, odsłaniając kwasy nukleinowe. Następnie odsłonięte kwasy nukleinowe są mocowane na błonie przez ich denaturację i hybrydyzują z sondami radioaktywnymi.

Rysunek 1: Metoda hybrydyzacji kolonii

Kolonia to skupisko bakterii powstałych z pojedynczej komórki bakteryjnej poprzez rozmnażanie bezpłciowe. W związku z tym wszystkie komórki bakteryjne w danej kolonii posiadają ten sam skład genetyczny, jak również przetransformowany materiał genetyczny. Ogólnie bakterie są transformowane za pomocą wektorów plazmidowych lub kosmidowych.

Co to jest hybrydyzacja płytki nazębnej?

Hybrydyzacja łysinek jest metodą przesiewową pod kątem rekombinowanych fagów. Jest to modyfikacja hybrydyzacji kolonii Bentona i Devisa w 1977 roku. Metoda ta jest również nazywana winda nazębna. Procedura hybrydyzacji łysinek jest podobna do procedury hybrydyzacji kolonii, a łysinki unosi się przez kontakt z błoną nitrocelulozową. Kwasy nukleinowe są następnie eksponowane i mocowane na membranie, hybrydyzując z pożądanymi sondami.

Rycina 2: Łysinki na płytce agarowej

Płytka to przezroczysta strefa na płytce agarowej wytwarzana przez konkretnego bakteriofaga w wyniku lizy komórek bakteryjnych na tym obszarze. Ze względu na mniejszą ilość DNA przeniesionego na błonę nitrocelulozową, hybrydyzacja łysinek wytwarza mniej sygnałów tła.

Podobieństwa między hybrydyzacją kolonii a płytkami nazębnymi

Różnica między hybrydyzacją kolonii a łysinkami

Definicja

Hybrydyzacja kolonii odnosi się do metody selekcji kolonii bakteryjnych z pożądanymi genami, podczas gdy hybrydyzacja łysinek odnosi się do metody przesiewowej stosowanej do identyfikacji rekombinowanych fagów.

Opracowany przez

Hybrydyzacja kolonii została po raz pierwszy opracowana przez Grunsteina i Hognessa, podczas gdy hybrydyzacja łysinek została po raz pierwszy opracowana przez Bentona i Devisa w 1977 roku.

Rodzaje bibliotek

Hybrydyzacja kolonii obejmuje identyfikację bibliotek opartych na plazmidach lub kosmidach, podczas gdy hybrydyzacja łysinek obejmuje identyfikację bibliotek fagowych.

Liczba wind

Kolonie można podnosić jednorazowo, podczas gdy płytki można podnosić kilka razy.

Sygnały tła

Wniosek

Hybrydyzacja kolonii jest metodą przeszukiwania kolonii bakteryjnych w bibliotekach wytworzonych za pomocą wektorów plazmidowych lub kosmidowych. Z drugiej strony hybrydyzacja łysinek jest metodą przeszukiwania bakteriofagów w bibliotekach fagowych. Główną różnicą między hybrydyzacją kolonii i łysinek jest rodzaj bibliotek przeszukiwanych w każdej metodzie.

Referencja:

1. Kaksonen, Anna. „Podejścia molekularne do analizy społeczności drobnoustrojów”. Wypłukiwanie – BioMineWiki, 20 kwietnia 2006 r., Dostępne tutaj2. Dale, JW i PJ Greenaway. „Identyfikacja rekombinowanych fagów przez hybrydyzację łysinek”. Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.), Narodowa Biblioteka Medyczna USA, dostępne tutaj

Zdjęcie dzięki uprzejmości:

1. „Blot Hybridization” autorstwa Kaksonena – http://wiki.biomine.skelleftea.se/biomine/molecular/index_22.htm (domena publiczna) przez Commons Wikimedia 2. „M. tablica smegmatis” Autor: Wazzzup7up – Praca własna (domena publiczna) przez Commons Wikimedia