ten główna różnica między elektroforezą żelową a SDS PAGE jest to elektroforeza żelowa to technika stosowana do oddzielania DNA, RNA i białek, podczas gdy SDS PAGE to rodzaj elektroforezy żelowej stosowanej głównie do oddzielania białek. Generalnie SDS PAGE daje lepszą rozdzielczość niż zwykła elektroforeza żelowa.

Elektroforeza żelowa i SDS PAGE to techniki w biotechnologii, które pomagają w separacji makrocząsteczek na podstawie ładunku i wielkości. Zazwyczaj w elektroforezie żelowej do rozdzielania wykorzystuje się wkłucia w żelu agarozowym, podczas gdy SDS PAGE wykorzystuje wkłucia w żelu poliakrylamidowym.

Kluczowe obszary objęte

1. Co to jest elektroforeza żelowa? – Definicja, procedura, znaczenie 2. Co to jest STRONA KARTY CHARAKTERYSTYKI? – Definicja, procedura, znaczenie 3. Jakie są podobieństwa między elektroforezą żelową a SDS PAGE? – Zarys wspólnych cech 4. Jaka jest różnica między elektroforezą żelową a SDS PAGE? – Porównanie kluczowych różnic

Kluczowe terminy: agaroza, DNA, elektroforeza żelowa, poliakrylamid, białka, SDS PAGE

Co to jest elektroforeza żelowa?

Elektroforeza żelowa to technika oddzielająca fragmenty makrocząsteczek, takich jak DNA, RNA i białka, na podstawie ich wielkości i ładunku. Podczas elektroforezy żelowej makrocząsteczki poruszają się pod wpływem pola elektrycznego na matrycy żelowej, która zawiera pory, przez które poruszają się makrocząsteczki. Elektroforeza żelowa to ogólna technika, która analizuje DNA z technik PCR, RFLP, klonowania, sekwencjonowania DNA lub blottingu. Nanocząstki można również rozdzielać metodą elektroforezy żelowej. Żelowy sztyft jest przygotowywany z polisacharydu zwanego agarozą pochodzącego z wodorostów. Żele agarozowe składają się z długołańcuchowych cząsteczek agarozy połączonych ze sobą w pajęczą sieć. Film 1 opisuje przygotowanie żelu agarozowego.

Zarówno DNA, jak i RNA zawierają grupy fosforanowe na każdym z ich monomerycznych nukleotydów. W związku z tym mają równy ładunek ujemny w całej cząsteczce. Ponadto migrują w kierunku elektrody dodatniej pod polem elektrycznym. Szybkość migracji zależy od wielkości kwasu nukleinowego. Krótsze cząsteczki migrują szybciej przez pory, podczas gdy większe zajmują trochę czasu.

Rycina 1: Prążki DNA na żelu agarozowym

Co to jest STRONA SDS

SDS PAGE (elektroforeza w żelu dodecylosiarczan sodu-poliakrylamid) to technika analityczna stosowana do oddzielania naładowanych cząsteczek w zależności od wielkości. W tym procesie SDS służy do izolacji białek poprzez ich denaturację. Ponieważ SDS jest detergentem; trzeciorzędowa struktura białek zostaje przez to zakłócona, sprowadzając złożone białko do liniowej cząsteczki. Powleka również tę liniową cząsteczkę białka jednorodnym ładunkiem ujemnym. SDS PAGE składa się z dwóch żeli o różnych stężeniach. Warstwa górna nazywana jest żelem układającym, do którego ładowane są próbki, podczas gdy warstwa dolna nazywana jest żelem rozdzielającym. Stężenie poliakrylamidu żelu układającego wynosi 3,5-4% (duża wielkość porów) i koncentruje białka w jednym prążku. Stężenie poliakrylamidu w żelu rozdzielającym wynosi 4-20% (mały rozmiar porów) i oddziela białka na podstawie ich wielkości. Film 2 przedstawia przygotowanie SDS PAGE.

SDS PAGE zapewnia szybką separację białek, ułatwiając późniejszą analizę, taką jak Western blot.

Rysunek 2: Prążki białka na SDS PAGE

Ponieważ zdolność rozdzielcza SDS PAGE jest wyższa niż zwykłego żelu agarozowego, SDS PAGE pomaga oddzielić małe fragmenty DNA o wielkości 5-500 bp.

Podobieństwa między elektroforezą żelową a SDS PAGE

Różnica między elektroforezą żelową a SDS PAGE

Definicja

Elektroforeza żelowa: Technika stosowana do oddzielania fragmentów makrocząsteczek, takich jak DNA, RNA i białka na podstawie ich wielkości i ładunku

STRONA KARTY: Technika analityczna stosowana do oddzielania naładowanych cząsteczek na podstawie rozmiaru

Kompozycja

Elektroforeza żelowa: Równe w całym żelu; składa się z agarozy

STRONA KARTY: Dwa żele o różnych stężeniach; składa się z poliakrylamidu

Uruchom konfigurację

Elektroforeza żelowa: Bieg poziomy

STRONA KARTY: Bieg pionowy

Metodologia odlewania

Elektroforeza żelowa: Zastyga jak stygnie

STRONA KARTY: Zestawy przez reakcję chemiczną

Rozmiar porów

Elektroforeza żelowa: Wielkość porów nie jest jednolita; wyższe stężenie agarozy, mniejsze rozmiary porów

STRONA KARTY: Rozmiar porów jest jednolity; stosunek akryloamidu do bis-akryloamidu określa wielkość porów

Stężenie

Elektroforeza żelowa: 0.5-2%

STRONA KARTY: 6-15%

Separacja

Elektroforeza żelowa: Kwasy nukleinowe 50-20 000 pz

STRONA KARTY: Białka 5-250 000 Da

Warunki

Elektroforeza żelowa: Generalnie działa w natywnych warunkach

STRONA KARTY: Warunki denaturacji

Przygotowanie

Elektroforeza żelowa: Prosty

STRONA KARTY: Złożony proces

Barwiący

Elektroforeza żelowa: Z bromkiem etydyny

STRONA KARTY: Barwienie Coomassie lub barwienie srebrem

Wniosek

Elektroforeza żelowa to technika analityczna, która oddziela makrocząsteczki, takie jak DNA, RNA i białka na podstawie ich wielkości. SDS PAGE to rodzaj elektroforezy żelowej stosowanej głównie do rozdzielania białek w warunkach denaturujących. SDS PAGE ma wyższą zdolność rozdzielczą w porównaniu ze zwykłą elektroforezą żelową. Główną różnicą pomiędzy elektroforezą żelową a SDS PAGE jest rodzaj rozdzielanych makrocząsteczek i ich procedura.

Referencja:

1. „Elektroforeza żelowa”. Akademia Khana, dostępna tutaj2. „Elektroforeza w żelu poliakrylamidowym SDS (SDS-PAGE).” Diamantina Institute, 26 kwietnia 2017 r., Dostępne tutaj

Zdjęcie dzięki uprzejmości:

1. „Elektroforeza żelowa 2” Von Mnolf – Zdjęcie zrobione w Innsbrucku, Austria (CC BY-SA 3.0) przez Commons Wikimedia 2. „Coomassie3” Autor: Yikrazuul – Praca własna (CC BY-SA 3.0) przez Commons Wikimedia