ten główna różnica między nitrocelulozą a membraną nylonową jest to, że Membrana nitrocelulozowa ma wysokie powinowactwo do wiązania białek, podczas gdy membrana nylonowa ma wysokie powinowactwo do wiązania kwasów nukleinowych. Ponadto oddziaływania hydrofobowe i elektrostatyczne wiążą makrocząsteczki z membranami nitrocelulozowymi, podczas gdy oddziaływania jonowe, hydrofobowe i elektrostatyczne wiążą makrocząsteczki z membranami nylonowymi

Membrana nitrocelulozowa i nylonowa to dwa rodzaje membran, na które z żelu przenoszone są makrocząsteczki. Jednak membrany nitrocelulozowe mogą być również stosowane do wiązania DNA i RNA.

Powinowactwo, Biodyne A, Biodyne B, Nitroceluloza, Kwasy Nukleinowe, Nylon, Wielkość Porów, Białka

Co to jest membrana nitrocelulozowa

Membrana nitrocelulozowa jest powszechną matrycą stosowaną w Western blot ze względu na wysokie powinowactwo wiązania białek. Może być jednak stosowany do wykrywania kwasów nukleinowych oprócz unieruchomionych białek i glikoprotein. Immobilizacja makrocząsteczek następuje głównie poprzez oddziaływania hydrofobowe. Wiązania wodorowe powstają również między grupami nitrowymi błony i aminokwasowymi łańcuchami bocznymi białek. Immobilizacja białka będzie wysoka przy wysokich stężeniach soli i niskich stężeniach metanolu.

Rysunek 1: Zasada Blot

Membrany nitrocelulozowe są dostępne w 100% czystych formach nitrocelulozy o dużej powierzchni, która jest jednorodna. Dostępne rozmiary wstępne to 0,2 μm i 0,45 μm. Mały rozmiar porów jest lepszy do wiązania z małymi białkami (<14 kDa). Zdolność wiązania i zatrzymywania białek wynosi 80-250 μg/cm². Wstępnie zmontowane membrany są gotowe do użycia. Jedną z głównych zalet membran nitrocelulozowych jest ich bardzo niskie tło, ponieważ można je łatwo blokować. Podparte membrany nitrocelulozowe można usuwać i ponownie sondować.

Co to jest membrana nylonowa

Membrana nylonowa jest szeroko stosowaną matrycą do wiązania kwasów nukleinowych. Membrany nylonowe są mechanicznie mocniejsze niż membrany nitrocelulozowe. Dwa główne typy membran nylonowych stosowanych w blottingu to Biodyne A i Biodyne B. Wielkość porów obu typów wynosi 0,45 μm. Są odporne na ciepło i rozpuszczalniki. Nie kurczą się, nie pękają ani nie rozrywają. Obie dają niższe tło niż membrany nitrocelulozowe.

Rysunek 2: Membrana Southern Blot

Podobieństwa między nitrocelulozą a membraną nylonową

Różnica między nitrocelulozą a membraną nylonową

Definicja

Membrana nitrocelulozowa odnosi się do lepkiej membrany stosowanej do unieruchamiania kwasów nukleinowych i białek podczas blottingu, podczas gdy membrana nylonowa odnosi się do rodzaju membrany o wysokiej wytrzymałości i odporności cieplnej stosowanej do unieruchamiania makrocząsteczek.

Składa się z

Membrany nitrocelulozowe składają się z nitrowanej celulozy, podczas gdy membrany nylonowe składają się z niezmodyfikowanego lub dodatnio naładowanego nylonu Biodyne A i Biodyne B.

Rozmiar porów

Wielkości porów membran nitrocelulozowych wynoszą 0,2 μm i 0,45 μm, podczas gdy wielkość porów membran nylonowych wynosi 0,45 μm.

Wytrzymałość

Membrany nitrocelulozowe są kruche i dlatego nie nadają się do ponownego użycia, podczas gdy membrany nylonowe są wytrzymałe mechanicznie.

Metoda przesyłania

Transfer elektroforetyczny jest stosowany głównie do przenoszenia białek na membrany nitrocelulozowe, podczas gdy transfer kapilarny jest powszechną praktyką w przypadku membran nylonowych.

Podobieństwo

Membrany nitrocelulozowe mają wysokie powinowactwo do białka, podczas gdy membrany nylonowe mają wysokie powinowactwo do kwasów nukleinowych. Membrany nitrocelulozowe można również stosować do kwasów nukleinowych.

Bibuła

Membrany nitrocelulozowe są lepsze do Western blotting, podczas gdy membrany nylonowe są lepsze do Southern i Northern Blotting.

Wiążące interakcje

Oddziaływania hydrofobowe i elektrostatyczne wiążą makrocząsteczki z błonami nitrocelulozowymi, podczas gdy oddziaływania jonowe, hydrofobowe i elektrostatyczne wiążą makrocząsteczki z błonami nylonowymi.

Zdolność wiązania białka

Zdolność wiązania białek membrany nitrocelulozowej wynosi 80-250 μg/cm² natomiast zdolność wiązania białek membrany nylonowej wynosi 150-200 μg/cm².

Wniosek

Membrana nitrocelulozowa jest kruchą membraną stosowaną głównie do unieruchamiania białka w metodzie Western blotting, podczas gdy membrana nylonowa jest mocną membraną stosowaną głównie do unieruchamiania kwasów nukleinowych. Membrany nitrocelulozowe wiążą cząsteczki poprzez oddziaływania hydrofobowe, podczas gdy membrany nylonowe wiążą cząsteczki poprzez oddziaływania elektrostatyczne. Dlatego główną różnicą między membraną nitrocelulozową a nylonową jest powinowactwo.

Referencja:

1. „Membrany nitrocelulozowe do Western Blotting | Thermo Fisher Scientific – LK.” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, dostępne tutaj2. „Membrana nylonowa Biodyne A, 0,45 m, 8 cm x 12 cm.” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, dostępne tutaj3. „Membrana nylonowa Biodyne B, 0,45 m, 8 cm x 12 cm.” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, dostępne tutaj

Zdjęcie dzięki uprzejmości:

1. „Biologia plam” Autor: Gbdivers – Praca własna (CC BY-SA 3.0) przez Commons Wikimedia2. „Southern blot membrana” Bojan Žunar - Praca własna (CC BY-SA 4.0) przez Commons Wikimedia